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William
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Curva de Fragilidade Osmótica em hemacias

em 10/1/2018, 21:37
Curva de Fragilidade Osmótica 

Os eritrócitos de pessoas portadoras de esferocitose são mais frágeis que os eritrócitos normais em soluções com concentrações diferenciadas de NaCl (0,1%, 0,2% ... a 0,9%). A hemólise dos eritrócitos é avaliada porcentualmente e comparada com o padrão de Normalidade.

Equipamento 

• tubo 12 x 75 mm 
• micropipeta de 50 ml 
• pipeta de 5 ml 
• espectrofotômetro ou fotocolorímetro 
• papel milimetrado 

Reagentes 

Solução estoque de NaCl osmoticamente equivalente a 10% 

NaCl 9,0 g
Na2HPO4 1,3 g 
NaH2PO4 . H2O 0,3 g
H2O q.s.p. 100 ml

Solução trabalho de NaCl 0,1% a 0,9%


Procedimento

a. Identificar em cada tubo de hemólise a concentração da solução de NaCl que o mesmo receberá (0,1%, 0,2% ... 0,9%). 
b. Colocar em cada tubo 5 ml da respe 
c. Adicionar em cada tubo (preferencialmente) ou EDTA completa mistura do sangue na solução. 
d. Deixar em repouso por 25 a 30 minu 2.000 rpm. 
e. Retirar o sobrenadante com pipeta Pasteur de cada tubo, transferindo previamente identificado. 
f. Fazer a leitura da densidade óptica (DO) de cada tubo em comprimento de onda 415 nm, ou filtro verde. Usar o sobrenadante da solução NaCl 0,9% como 
g. A densidade óptica do tubo NaCl 0,1% representará 100% de hemólise, e desse valor serão calculados por regra de três simples todos os outros valores. Ex.:

D.O. NaCl 0,1% ----- 100% de lise
D.O. NaCl 0,2% ------ X

x = % de lise de NaCl a 0,2%

Valores Referenciais


Referencia: Academia de Ciência e Tecnologia de São José do Rio Preto - SP Autor: Autor: Prof. Dr. Paulo Cesar Naoum

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William Villela de Carvalho
Biomédico Consultor em Gestão
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